选择怀孕可以冷冻保存胚胎

选择怀孕可以冷冻保存胚胎!1983年，Trounson报道使用冷冻保存和融解的人类胚胎移植首例妊娠成功。此后冷冻保存胚胎用于辅助生育技术得以推广。1987年之前3577个胚胎用各种方法冷冻保存融解、移植，大约50%（1794个）融解后有存活力，其中1119个进行了胚胎移植。结果163例获得妊娠（13.4%），其中自然流产占26%，宫外孕4%，此外2例宫内及临产时诊断胎儿畸形。

首例活产的人类胚胎是用了不同于目前广泛使用的冷冻保存法。此例胚胎系用1.5mol/L的DMSO冷冻保存。在室温中将冷冻保存液浓度每隔10min逐步增加。在培养液（PBS）中，DMSO的初始浓度为0.25mol/L，以后则逐步增加到0.5、1.0和1.5mol/L浓度。DMSO浓度达到1.5mol/L后，培养剂中的胚胎以2℃/min的速率从室温冷却到-6℃，然后进行人工种植并在-6℃保持30min。试管再以0.3℃/min速率冷却到-80℃，然后放入液氮内（-196℃）贮存。在融解时试管中胚胎从液氮中转移到-80℃控制箱，再以8℃/min速率融解到+4℃。将DMSO逆向稀释。应用上述方法冻融处于4-细胞或8-细胞发育阶段的胚胎，则68/136胚胎存活，其半数或多一些卵裂球保持完好。68个胚胎移植到45个患者中后结果导致9例临床妊娠。

一、用DMSO冷冻保存胚胎的方法

（1）胚胎放入冷冻玻璃瓶或管子内。

（2）胚胎从+23℃开始，以2℃/min的速率冷却到-6℃。

（3）种植并在-6℃保持10min。

（4）胚胎以0.1℃/min速率冷却到-80℃。

（5）投入液氮内。

（6）在室温（+23℃）下加入DMSO，每隔10min增加浓度0.25mol/L，直到1.5mol/L。

用DMSO冷冻保存卵裂胚胎而获临床妊娠的报道发表不久，Cohen等报道应用冷冻/融解人类囊胚获得活产婴儿。该报道称体外受精获得的胚胎，受精后在人工环境内可放置4～7d。如囊胚继续发育，则将胚胎放进Earl液中，在室温下加入甘油，经过6个不同的步骤，使甘油最后的浓度达到8%～10%。然后将胚胎放进试管内，从室温开始以1℃/min速率降到-7℃，进行手工种植。此后以0.3℃/min速率将试管冷却到-36℃，然后投入液氮中。

二、囊胚冷冻保存步骤

（1）囊胚从23℃起以2℃/分速率冷却到-7℃。

（2）种植并保持10min。

（3）以0.3℃/min速率冷却到-30℃。

（4）投入液氮内。

胚胎融解时，则经历速融过程，即把试管从液氮中移入30℃水浴。然后经逐步稀释除去甘油冷冻液，即培养基中甘油浓度逐步稀释从8%（10min），6%（12min），5%（14min），4%（16min），3%（18min），2%（20min）到1%（20min）。然后在新鲜培养基中冲洗和移植胚胎。在这第一组应用人囊胚进行的实验中，11个患者接受胚胎移植后结果2例妊娠。Testart等报道用丙二醇（PROH）冷冻保存和贮存体外培养第1～2天的胚胎是一个有效方法。用PROH冷冻液能保存发育到原核期、2-细胞期或4-细胞期的胚胎。

三、用PROH冷冻保存胚胎的方法

（1）在室温下加入0.5mol/LPROH，每隔10min递增0.5mol/L，直到1.5mol/L。

（2）胚胎放入管中，在HEPES-HTF培养液内加入蔗糖，浓度为0.2mol/L。

（3）胚胎以2℃/min速率冷却到-7℃。

（4）在-7℃下种植及维持10min。

（5）胚胎以0.3℃/min速率冷却到-30℃。

（6）投入液氮内。

最近Cohen等还报道47个胚胎移植周期应用PROH冷冻液，结果12个妊娠，并认为适时融解和移植胚胎是提高临床效果的重要因素。有关资料证实胚胎融解要与自然周期同步。换言之，移植周期中LH峰提示开始排卵。在自然周期排卵后3h内应同步融解胚胎。如果这种同步融解步骤超过了3h妊娠均未成功。如果采卵周期中于排卵前12h内采卵，而移植的胚胎也在排卵前12h内融解，则妊娠率最高。在有的单位PROH最常用于早期胚胎冷冻，少数允许继续生长成囊胚的胚胎则用甘油作为冷冻液。用这种胚胎选择冷冻法，若胚胎在2-细胞期或4-细胞期未能确定其是否正常，可允许发育到囊胚形成，如它们能达到这个发育期，胚胎就可进行冷冻保存。目前认为如果胚胎显示正常发育，则胚胎应尽早冷冻保存。胚胎在体外培养的环境内时间越短，临床效果越佳。但是在某些情况下，若胚胎发育不规则，在冷冻前可让其发育到囊胚期，以证实冷冻胚胎是存活的。Trounson与Siobiom最近报道了超速冷冻人类胚胎的可行性。用于放置胚胎的Dolbecco磷酸盐缓冲液，含有3mol/L的DMSO与0.25mol/L的蔗糖，并放在冷冻管内，管子是密封的，将胚胎于室温下置于含上述DMSO溶液的管子中持续3min，然后直接投入-196℃液氮中。胚胎融解时则直接从液氮移到37℃水浴。超速冷冻的22例胚胎中18例完好存活。