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弥漫大b细胞淋巴瘤诊断方法:
1、眼观:标本为3小块灰白色组织,总体积3.5cm×2.5cm×1cm,质软。
2、镜检:淋巴结组织有被膜及残存的淋巴窦与淋巴滤泡,但大部区域已被弥漫分布的瘤细胞取代,瘤内可见宽窄不一、束状排列、玻璃样变性的纤维束把瘤组织分隔成不规则片块状、小团状或穿插于瘤细胞之间(图2)。细胞主要有2种:透明细胞与非透明细胞。前者占多数,细胞较大,长径10~15μm,胞浆透明,核大、圆形或卵圆形及不规则形,核膜清晰,染色质粗颗粒状,核中央可见嗜酸性小核仁,核分裂象10~12/10hpf;后者胞浆稀少,胞界不清,核圆或不规则,染色较深,偶见核仁及核裂,类似中心或中心母细胞。个别瘤细胞有双核或分叶核。不少区域瘤细胞已有片状坏死或间质水肿,还可见瘤细胞围绕血管呈内皮下浸润性生长。
3、免疫组化:10%中性缓冲福尔马林溶液固定标本,石蜡切片,采用迈新公司及dako公司试剂,二步法染色(envisionsystem)。瘤细胞lca(+),l26(+)(图4),其余uchl-1、kp-1、cd15、cd30、κ、λ、bcl-2、iga、igm、ck、ebv等皆为(-)、ki-67指数>80%。
4、基因重排:用10%中性缓冲福尔马林固定的石蜡包埋组织提取dna、采用半巢式(semi-nested)pcr扩增法对瘤细胞进行igh基因克隆性重排检测,引物第一轮为fr3a和ljh、第二轮为fr3a和vljh,并用宫颈原发性b细胞淋巴瘤作阳性对照,以淋巴细胞反应性增生作阴性对照,结果见图5,在目标基因范围内(100~120bp)出现明显的dna扩增条带。tcr-β基因重排为阴性。
5、dna测定:石蜡切片,feulgen染色,采用华东理工大学与上海医科大学共同研究制的ims型图像分析综合系统进行瘤细胞dna测定(图6),示超二倍体,dna指数2.07,平均dna质量13.34pg,s期细胞23.76%。
6、病理诊断:右锁骨上淋巴结大b细胞淋巴瘤,结合临床可符合来自原发性纵隔大b细胞淋巴瘤。lca(+)、l26(+),igh基因克隆性重排、ki-67指数>80%、dna为超二倍体。
原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(pmlbl),最早出现在70年代初两篇有关纵隔淋巴瘤文献中〔1〕,到80年代才被确立为特殊的临床病理类型(specificclinicopathologicentity),至1996年文献上约有300例记载〔2〕,虽然在real分类方案内已列为一特殊类型,但在1999年abou-eella〔3〕比较了43例pmlbl与352例非纵隔大b淋巴瘤认为除了发病年龄、性别、部位、大小外两者无明显差异,他们主张pmlbl只能作为一种临床综合征,若要作为一特殊疾病类型必须进一步研究。
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